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細胞劃痕實(shí)驗-第三方檢測機構
發(fā)布時(shí)間: 2024-07-08 點(diǎn)擊次數: 107次細胞劃痕實(shí)驗又叫創(chuàng )傷愈合實(shí)驗,當細胞生長(cháng)至融合成單層狀態(tài)時(shí),在細胞層上人為制造一個(gè)空白區域,稱(chēng)為“劃痕/傷口”,通過(guò)一段時(shí)間的培養,邊緣的細胞會(huì )逐漸向無(wú)細胞區域遷移,使“傷口”愈合,通過(guò)測量細胞遷移距離及速度反映細胞的遷移能力及修復能力。
在化妝品修復功效評價(jià)中,細胞劃痕實(shí)驗可以模擬皮膚受損后的自然愈合過(guò)程,用于觀(guān)察化妝品等外源因素對細胞遷移、修復和相互作用的影響。
中科檢測可開(kāi)展細胞劃痕實(shí)驗,評估化妝品成分或產(chǎn)品對促進(jìn)皮膚修復和愈合效果,出具的化妝品修復功效評價(jià)報告具有CMA資質(zhì)。
細胞劃痕實(shí)驗應用方向
遷移能力:實(shí)驗中細胞遷移填充劃痕區域的速度可以作為評估化妝品促進(jìn)皮膚愈合的一個(gè)指標。在實(shí)驗中表現出強遷移能力的化妝品成分,可能在實(shí)際應用中有助于加快皮膚受損區域的修復。
增殖效果:細胞在劃痕區域的增殖情況反映了化妝品促進(jìn)皮膚細胞再生的潛力。增殖效果好的化妝品可能在實(shí)際使用中有助于皮膚恢復活力和彈性。
安全性評估:通過(guò)細胞劃痕實(shí)驗可以初步評估化妝品成分的安全性。如果在細胞水平上沒(méi)有表現出毒性或負面影響,這為進(jìn)一步的體內測試和人體試驗提供了基礎。
劑量效應關(guān)系:實(shí)驗中可以測試不同濃度的化妝品成分,以確定有效劑量和安全劑量范圍,這有助于指導產(chǎn)品配方的開(kāi)發(fā)。
長(cháng)期效果預測:雖然細胞劃痕實(shí)驗是短期的,但它可以為預測長(cháng)期皮膚修復效果提供一定的依據。例如,能夠顯著(zhù)促進(jìn)細胞遷移和增殖的成分,可能在實(shí)際使用中有助于減少疤痕形成。
臨床試驗:細胞劃痕實(shí)驗的結果需要通過(guò)臨床試驗來(lái)驗證。臨床試驗可以在實(shí)際皮膚上評估化妝品的效果,包括愈合時(shí)間、皮膚質(zhì)地改善和整體修復效果。
綜合評估:細胞劃痕實(shí)驗只是評估化妝品修復功效的多種方法之一。它的結果需要與分子水平的研究、動(dòng)物模型實(shí)驗以及其他體外實(shí)驗結果相結合,以全面評價(jià)化妝品的功效。
細胞劃痕實(shí)驗原理
細胞劃痕實(shí)驗是通過(guò)在細胞單層上劃痕并通過(guò)延時(shí)顯微鏡定期捕獲圖像,從而研究細胞遷移運動(dòng)、修復能力和細胞間相互作用的實(shí)驗室技術(shù),基本原理是:在融合的單層細胞上人為制造一個(gè)空白區域,稱(chēng)為“劃痕/傷口”,劃痕邊緣的細胞會(huì )逐漸進(jìn)入空白區域使“劃痕/傷口”愈合,于細胞遷移過(guò)程中在開(kāi)始和定期捕獲圖像,通過(guò)測量不同時(shí)間點(diǎn)的劃痕間距并計算差值,可對細胞的遷移能力做出判斷。
細胞劃痕實(shí)驗步驟
1、準備
所有能滅菌的器械都要滅菌,包括直尺(或者24孔板蓋)和marker筆在操作前紫外照射30min(超凈臺內)。
2、流程
1)鋪板:將細胞消化后加入培養基終止消化,將細胞吹打均勻,然后按比例鋪板。如果不均勻可以用手掌對著(zhù)一橫邊和一縱邊輕輕拍打,切忌四個(gè)邊都拍打,這樣細胞很容易聚到中間。
2)掌握細胞狀態(tài),過(guò)夜能長(cháng)滿(mǎn)為佳。
3)第二天用黃槍頭比著(zhù)直尺(或者槍頭,板蓋),垂直在原來(lái)的培養基里劃痕,每孔1道(也可多劃幾道,參考細胞狀態(tài)),槍頭要垂直,不能傾斜。
4)用PBS清洗細胞1-2次,去除劃下的細胞,加入低血清培養基(或者培養基);然后去顯微鏡下拍照,盡量高倍鏡低倍鏡都拍照,可以事先在板子底部用Marker筆畫(huà)上小圓圈標記來(lái)保證能拍到同一個(gè)點(diǎn),作好記錄。
5)加藥,放入37度5%CO2培養箱,培養時(shí)間依照實(shí)驗要求進(jìn)行,通常以12h、24h、48h為準。按所需時(shí)間節點(diǎn)安排取樣拍照時(shí)間。
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